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非洲猪瘟检测方法

更新时间:2019-03-13

简要描述:

深芬仪器CSY-E96D非洲猪瘟检测方法非洲猪瘟快速检测仪

实验所需自备试验器材必备
检测仪(450nm)
高精度加样器及枪头:10-200ul 1000-5000ul
37℃恒温箱或水浴锅
蒸馏水或去离子水

深芬仪器CSY-E96D非洲猪瘟检测方法非洲猪瘟快速检测仪

  • 实验所需自备试验器材必备
  • 检测仪(450nm)
  • 高精度加样器及枪头:10-200ul    1000-5000ul
  • 37℃恒温箱或水浴锅
  • 蒸馏水或去离子水

试剂盒组成:

试剂盒组成

48孔配置

96孔配置

保存

说明书

1份

1份

 

封板膜

2片

2片

 

密封袋

1个

1个

 

酶标包被板

1×48

1×96

2-8℃保存

阴性对照

0.5ml*1

0.5ml*1

2-8℃保存

阳性对照

0.5ml*1

0.5ml*1

2-8℃保存

检测抗原-HRP

5 ml×1瓶

10 ml×1瓶

2-8℃保存

样品稀释液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

底物A液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

底物B液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

终止液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

20×浓缩洗涤液

15ml×1瓶

25ml×1瓶

2-8℃保存

非洲猪瘟快速检测仪试剂准备

1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒,平衡至室温。

  • 从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,属于正常现象;放置室温,轻摇均匀,待结晶完全溶解后再配置洗涤液。可将20ml浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水稀释配置成400ml工作浓度的洗涤液,未用完的放回4℃
  • 20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

非洲猪瘟快速检测仪试剂盒采用双抗一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被非洲猪瘟的包被微孔中,依次加入标本、HRP标记的检测抗原,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD 值),与CUT OFF值相比较,从而判定标本中非洲猪瘟ASF)的存在与否。

非洲猪瘟快速检测仪前处理方法

1:血清:使用不含热源和内素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞小心地分离

方法2室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠或甘素抗凝,离心30分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。

3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

5. 组织标本:将组织加入适量生理盐捣碎,3000转离心10分钟取上清液

6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.

7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

非洲猪瘟快速检测仪CSY-E96D非洲猪瘟检测方法czcz作步骤:

1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.  设置阴、阳性对照孔和样本孔,阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照各50μL;

3.  待测样本孔加待测样本10μL,在加样本稀释液40μL;

4.  随后阴、阳性对照孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗原100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.  弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光水浴锅孵育15min。

7.  每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

 

 

李丹q 2072559023**3122752409

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