非洲猪瘟检测方法

深芬仪器CSY-E96D非洲猪瘟检测方法非洲猪瘟快速检测仪

• 实验所需自备试验器材*
• 检测仪（450nm）
• 高精度加样器及枪头：10-200ul    1000-5000ul
• 37℃恒温箱或水浴锅
• 蒸馏水或去离子水

试剂盒组成：

非洲猪瘟快速检测仪试剂准备

1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。

• 从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象；放置室温，轻摇均匀，待结晶*溶解后再配置洗涤液。可将20ml浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水稀释配置成400ml工作浓度的洗涤液，未用完的放回4℃
• 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

非洲猪瘟快速检测仪试剂盒采用双抗一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被非洲猪瘟抗体的包被微孔中，依次加入标本、HRP标记的检测抗原，经过温育并*洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），与CUT OFF值相比较，从而判定标本中非洲猪瘟（ASF）的存在与否。

非洲猪瘟快速检测仪前处理方法

1：血清：使用不含热源和内素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞小心地分离

方法2：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠或甘素抗凝，离心30分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

5. 组织标本：将组织加入适量生理盐捣碎，3000转离心10分钟取上清液

6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.

7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

非洲猪瘟快速检测仪CSY-E96D非洲猪瘟检测方法czcz作步骤：

1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.  设置阴、阳性对照孔和样本孔，阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照各50μL；

3.  待测样本孔加待测样本10μL，在加样本稀释液40μL；

4.  随后阴、阳性对照孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗原100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.  弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光水浴锅孵育15min。

7.  每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

李丹q 2072559023**3122752409